常用的培养基有淋球菌胎牛血清琼脂、巧克力马血琼脂，取标本时应将溃疡表面的痂皮和碎屑去掉，用灭菌拭子采取分泌物和溃疡的基底部物质。将标本接种于平皿上，划线分离。平皿放入5%～10%二氧化碳和饱和湿度的环境中，于33℃～35℃至少培养48小时看结果。杜克雷菌的菌落较小，如针尖大小，光滑，呈半球形。但菌落常呈不同的形状，可呈半透明状、浅灰色和肤黄色等。菌落的特点是紧密，如用接种环触之，几乎整个菌落在培养基上滑动。
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