对培养出的菌落可用氧化酶试验、硝酸盐还原试验、对辅酶ⅰ和氯化血红素等试验，根据不同需要加以鉴定；也可用过氧化氢酶、吲哚、尿素酶、糖的利用试验等加以鉴定。对菌珠进行鉴定是诊断软下疳所必需的。有些不具备条件的实验室，一发现有细菌生长即诊断本病，是不科学的。
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