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让尖锐湿疣现形的常见的5大检查

来源:| 作者:| 发布时间:2015年05月28日

尖锐湿疣疾病是由人类乳头瘤病毒感染所引起的。有些有很轻的表现,有些的表现却不明显到后期才有,所以我们必须对这种疾病有个很深的了解,这样能更早的发现症状,那么在正规医院对尖锐湿疣疾病的检查有哪些呢?接下来就一起来看看几种常见的。

一、基因诊断是最重要的检查方法

至今为止HPV主要实验诊断技术是核酸杂交一般都难于用传统的病毒培养及血清学技术检测。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,为HPV检测开辟了新途径。

(一)PCR方法标本的采集及处理

PCR方法第一步标本的采集和预处理:这一步主要是用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时,将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS离心(3000g,10min)洗涤2次,沉积细胞重悬于1mlPBS中,取0。5ml细胞悬液抽提DNA。

PCR方法第二部标本核酸的提取:这一步的提取方法是按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/LTris-HCl,pH7.4,10mmol/LEDTA,150mmol/LNaCl,0.4%SDS,1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜。

(二)PCR方法PCR扩增

1.引物设计和合成:对于HPV基因组一般是可分为早期区(E)和晚期区(L),而且在每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1,该引物与HPV6、11、16、18及33型有互补序列,也可扩增其它型HPV。

2.PCR反应试剂的配方就是TaqDNA聚合酶(2U/ml)、10×PCR缓冲液(500mmolKCl、40mmol/LMgCl2、100mmol/LTris-HCl、pH8.5),100μmol/LMY11和MY09贮备液,10mmol/LdNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。

3.PCR扩增方法和程序:这一步就是以100μlPCR反应液,用无菌0。5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。

(1)我们在进行实验前应该配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。

(2)在各反应管应该依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。

4.我们在做每次试验时应设阳性及阴性对照。以载有HPV的重组质粒(每反应为100pg)或含有HPV的细胞系(如Caski、HeLa)DNA为阳性对照,以无HPV的人细胞系DNA为阴性对照。

(1)凝胶电泳:我们在扩增反应结束后取出反应管,然后就冷却至室温,最后取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳,溴化乙锭染色,紫外分析仪下分析结果,分子量约为450bp处出现明显的DNA带。

(2)核酸杂交:对于这项一般是由于凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时,可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。

按照我们制定的标准方法制32PATP标记的寡核苷酸探针,并且还需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h,随后于30-55℃下用洗涤液(2×SSC、0.1%SDS)迅速冲洗杂交膜,除去多余探针。

这里所谈的就是最常见的5个检查方法,大家都是可以来参考一下的,我们的专家最后提醒大家:对于尖锐湿疣这样的高传染的顽固性病,我们必须及时发现及时去正规的医院治疗,以免传染给别人,最后也祝愿大家身体健康,合家欢乐。

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