从溃疡处取材作涂片时，由于脓性分泌物中的杂菌易使结果混淆，故应先将溃疡清洗干净，涂片可用革兰氏染色或姬姆萨染色。杜克雷菌在涂片中为短小(2μm)的呈平行直线排列的二极染色菌，革兰氏染色阴性。如果有典型的症状，实验室又能查到杜克雷菌，本病即可诊断。
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